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免疫熒光染色技術服務

簡要描述:免疫熒光又稱免疫熒光抗體。免疫熒光實驗原理是將熒光素標記在相應的抗體上,直接與相應抗原反應。其優(yōu)點是方法簡便、特異性高,非特異性熒光染色少,相對使用標記抗體用量偏大。利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。上海伊萊博致力于臨床前藥效學CRO實驗,多年的免疫熒光染色技術服務的經(jīng)驗,為廣大藥效學實驗提供保障。

  • 更新時間:2025-03-21
  • 廠商性質:代理商
  • 訪  問  量:1301

詳細介紹

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一、制片

選無自發(fā)性熒光的石英玻片或普通優(yōu)質玻片,洗凈后浸泡于無水/醇和乙氧,基乙,烷等量混合液中。用時取出用綢布擦凈。將待檢樣品如組織塊剪成適當大小印壓于玻片上。也可采用冰凍切片或石蠟切片樣品。

二、固定

除研究細胞表面抗原或不穩(wěn)定抗原可不固定外,一般均應固定。

三、水洗

固定后以冷的0.01 Mol/L pH7.4PBS液浸泡沖洗,最后以蒸餾水沖洗,防止自發(fā)性熒光。

四、染色

染色分直接染色法與間接染色法。

1. 材料與試劑

(1)熒光抗體,稀釋至應用濃度。

(2)0.01 Mol/LpH7.4PBS液

(3)9份優(yōu)質甘油加1份pH7.4PBS液即為甘油緩沖液。甘油有減少非特異性熒光的作用。

(4)帶蓋方盤

2. 直接染色法

(1)將固定好的玻片置于濕盤中,滴加熒光抗體染色液,以覆蓋為度,加蓋,37℃感做30

min~45min。

(2)PBS沖洗3次,每次沖洗3 min,即3x3沖洗。

(3)蒸餾水沖洗。

(4)滴甘油緩沖液一滴,封片,熒光顯微鏡檢查。

3. 間接染色法

(1)檢查抗原:

①取固定標本,加已知的免疫血清,37℃孵育30 min。

②以PBS液3x3沖洗。

③再加熒光標記的抗抗體,37℃℃孵育30 min。

④PBS 3x3沖洗。

⑤H2O沖洗,涼干。

6加甘油緩沖液,封片、鏡檢。

(2)檢查抗體:

①免疫后動物的淋巴組織涂片,自然干燥,甲醇固定,

2)滴加相應抗原液(按1:100~1:500稀釋),37℃孵育30 min。

③PBS液3x3沖洗。

④加熒光抗體,37℃孵育30 min。

⑤PBS液3x3沖洗。

⑥水洗,涼干。

⑦加甘油緩沖液,封片、鏡檢。



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