流式細胞檢測實驗分類

　　1、流式細胞術(shù)（FlowCytometry，F(xiàn)CM）：

　　就是對在高速流動的鞘液包裹下的細胞、粒子進行分析和分選的技術(shù)，這種細胞或粒子是經(jīng)過特異熒光標(biāo)記的。其特點是測量速度快，每秒鐘能測數(shù)千個乃*萬個細胞，且可進行多參數(shù)測量，另一特點是在分析的同時可把具有特征的細胞分離出來，這就是分選技術(shù)。

　　流式細胞檢測實驗重要參數(shù)：前向角散射（FSC）：前向角散射光的強度與細胞的大小有關(guān)，也就是說，同一個細胞群體，F(xiàn)SC強的，其細胞大一些，而FSC弱的，其細胞小一些。側(cè)向角散射（SSC）：側(cè)向角散射又稱90°散射或大角散射。側(cè)向角散射光對細胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感，對胞內(nèi)較大的顆粒也會有反應(yīng)。所以，側(cè)向角散射光的強弱可反應(yīng)細胞內(nèi)精細結(jié)構(gòu)和顆粒的性質(zhì)。熒光信號（FL）：是細胞或細胞上的熒光染料被激光激發(fā)后發(fā)射出的熒光，不同的熒光染料其發(fā)射波長不同。通過熒光強度可將同一個細胞群體中的有熒光標(biāo)記的細胞與無熒光標(biāo)記的細胞區(qū)分開來，也就是我們通常所說的陽性細胞，也可以將陽性細胞中的高FL的細胞與低FL的細胞區(qū)分開來，也就是可以把強陽性細胞和弱陽性細胞區(qū)分開來。一般的流式細胞儀只裝有一個激光光源（488nm），可測出三個FL，即FL1、FL2、FL3。FL2-W指檢測熒光的脈沖寬度，區(qū)分單個細胞和雙聯(lián)體細胞FL2-H指脈沖高度，細胞單位面積上的熒光濃度FL2-A指脈沖面積，即細胞熒光總和。

　　2、細胞周期檢測：

　　細胞內(nèi)的DNA含量隨著細胞周期進程發(fā)生周期性變化。利用PI標(biāo)記的方法，通過流式細胞儀對細胞內(nèi)DNA的相對含量進行測定，可分析細胞周期各時相的百分比，反映細胞的增殖狀態(tài)和非二倍體（異倍體）的DNA含量。其中PI即碘化丙錠，可以與細胞內(nèi)DNA和RNA結(jié)合，采用RNA抑制劑將RNA消化后，通過流式細胞術(shù)檢測與DNA結(jié)合的PI的熒光強度直接反映了細胞內(nèi)DNA含量的多少。

　　3、細胞增殖檢測

　　示蹤染料標(biāo)記法：示蹤染料能與細胞發(fā)生非特異性的穩(wěn)定結(jié)合，主要有兩種結(jié)合方式：進入胞內(nèi)與蛋白質(zhì)共價結(jié)合，如CFSE和BRSE；嵌入細胞膜的磷脂雙分子層，與細胞非公價結(jié)合，如PKH類和CellVue類等。CFSE是活細胞染料，又稱CFDA-SE或CFDA，其標(biāo)記細胞后對細胞毒性小，被激發(fā)后能發(fā)出很強熒光，且非常穩(wěn)定，只有當(dāng)細胞分裂時，母細胞內(nèi)的染料會被平均分配到子細胞中，細胞的熒光信號減少一半，細胞分裂代數(shù)越多，信號降低程度越大。

　　4、細胞因子檢測

　　細胞因子是一類能在細胞間傳遞信息、具有免疫調(diào)節(jié)和效應(yīng)等功能的蛋白或小分子多肽。根據(jù)功能可分為六大類：白細胞介素、干擾素、集落刺激因子、腫瘤壞死因子、生長因子和趨化因子。胞內(nèi)細胞因子：胞內(nèi)染色法（intracellularstainingassay）；胞間細胞因子：CBA法（cytometricbeadassay，流式微球陣列）。其優(yōu)點為單細胞水平，可多參數(shù)檢測。